液相色譜出現(xiàn)“雙峰”如何處理？
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有些用戶在使用液相色譜柱時(shí)，由于對(duì)樣品不了解或者處理不當(dāng)，分析方法不合理，導(dǎo)致峰形異常，數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，其中“雙峰”就是最常見的問題。如果出現(xiàn)“雙峰”，該如何處理呢？
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什么是“雙峰”？
“雙峰”現(xiàn)象就是液相色譜中最常見的問題之一，明明是同一種物質(zhì)，但在色譜圖中卻呈現(xiàn)2個(gè)峰值，實(shí)驗(yàn)人員會(huì)誤認(rèn)為有兩種物質(zhì)。
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為何會(huì)出現(xiàn)“雙峰”
出現(xiàn)色譜“雙峰”的原因一般有以下幾種：
一、色譜柱本身的問題
如果樣品分析時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜圖都有“雙峰”，尤其在分析單一純物質(zhì)時(shí)，那么基本可以斷定色譜柱時(shí)出現(xiàn)問題了，受污染或者受損是最常見的，一般是柱頭原因，被堵住或者污染了。
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一般如果如果進(jìn)樣量少，原來色譜柱正常，形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這種情況可以判斷為柱頭受堵。解決方案是將色譜柱反過來接，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑沖洗堵在柱頭的殘留物。
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如果發(fā)生峰拖尾，并且“雙峰”強(qiáng)弱相差不大，就有可能是柱頭固定相變臟或流失。使用者可以將進(jìn)樣頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料，不過這個(gè)不能經(jīng)常用，容易損壞。
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如果不是以上原因，則可能是柱塌陷造成的，這是就需要更換色譜柱了。
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二、溶劑的問題
HPLC分析柱多為反相色譜，流動(dòng)通常是甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。
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最常用的溶解方法是用流動(dòng)相溶解。在實(shí)際使用過程中，為了增強(qiáng)樣品的溶解性或穩(wěn)定性，會(huì)加入一些緩沖液，緩沖液中的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致出現(xiàn)“雙峰”。
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可以通過更換緩沖液，調(diào)整溶劑pH值，用流動(dòng)相配置樣品來解決這一問題。
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三、進(jìn)樣量的問題
純甲醇、純乙腈，純乙醇這類溶劑極性強(qiáng)度大的試劑，可能會(huì)導(dǎo)致“雙峰”。
一般分析體系中以水為主，如果樣品進(jìn)樣量大，單一的純物質(zhì)可能會(huì)出現(xiàn)“雙峰”，一般第二峰比第一峰小。
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這是因?yàn)闃悠返娜軇┡c流動(dòng)相極性相差太大，流動(dòng)相沒有及時(shí)將溶劑進(jìn)行稀釋，這時(shí)此情需要減少進(jìn)樣量。
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另外，進(jìn)樣量如果過大，色譜柱過載，也會(huì)出現(xiàn)“雙峰”現(xiàn)象。
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四、樣品原因
不同的樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無法分開，會(huì)以動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)存在。
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色譜分析時(shí)，在特定的條件下，參數(shù)在一定范圍內(nèi)，可能會(huì)出現(xiàn)“雙峰”，并且“雙峰”靠的很近，高度差不多，不拖尾，如果條件發(fā)生變化，尤其pH值變化，“雙峰”就會(huì)消失，如紅霉素等樣品就有這類情況。
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五、pH值
pH值對(duì)色譜“雙峰”的影響出現(xiàn)在分析中的每個(gè)環(huán)節(jié)上，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡中。
當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續(xù)變化影響，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)“雙峰”的情況。
恒譜生建議使用者在進(jìn)行樣品分析時(shí)，流動(dòng)相的pH要盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn)，不然也可能導(dǎo)致“雙峰”產(chǎn)生。
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“雙峰”是液相色譜柱使用時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)的場景，了解其產(chǎn)生原因并及時(shí)處理，可以有效延長液相色譜柱使用壽命。
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發(fā)布于: 2024-07-16