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HPLC保護柱的使用原理

??????? HPLC 色譜柱是液相色譜的重要組件,因為它是負(fù)責(zé)分離基質(zhì)中分析物的色譜柱。保護和保養(yǎng)色譜柱可確保我們不僅獲得可靠的結(jié)果,還能無故障操作。我們都知道 HPLC 色譜柱的使用壽命是有限的,但是如何確保獲得最長的使用壽命呢?

要回答這個問題,讓我們首先看看色譜柱可能被阻塞的原因。

??????? 一、引入 HPLC 色譜柱的樣品通常多種多樣且復(fù)雜

??????? 樣品含有許多可能與 HPLC 方法條件不兼容的成分。在沒有適當(dāng)?shù)臉悠分苽?預(yù)處理的情況下注入此類樣品可能會導(dǎo)致色譜柱堵塞。在反相分離過程中,殘留的蛋白質(zhì)和高疏水性化合物(如脂質(zhì))也可能不會完全洗脫出來,它們往往會慢慢吸附到色譜柱上并引起問題。

液相色譜柱?

??????? 二、不兼容的樣品稀釋劑和流動相

??????? 如果樣品稀釋劑與流動相不相容,那么當(dāng)將樣品引入流動相時,樣品可能會沉淀。如果稀釋劑與流動相相比極性太強或非極性,這通常會出現(xiàn)。

???????? 流動相緩沖液:緩沖液通常用作 HPLC 中的流動相。重要的是在使用前過濾這些緩沖鹽。有時,由于實驗室溫度的不同,一些緩沖液成分容易沉淀。使用過高濃度的緩沖液也會導(dǎo)致沉淀。

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??????? 三、來自磨損的泵密封件的顆粒物

??????? 泵密封件和噴油器轉(zhuǎn)子密封件通常由橡膠材料制成。由于正常磨損,這些組件往往會在溶劑管路中產(chǎn)生一些碎屑。如果不對泵和進樣口進行定期維護,碎屑往往會到達色譜柱篩板并堵塞色譜柱。

??????? 四、現(xiàn)在我們知道了可能導(dǎo)致阻塞的原因。我們?nèi)绾伪Wo它?

?????? 為了保護 HPLC 色譜柱(分析型和制備型)免受污染,例如進樣中的微粒、未過濾的流動相組分或進樣器磨損的泵密封/轉(zhuǎn)子密封的碎片,建議使用恒譜生液相色譜保護柱。

???????? 五、什么是保護柱?

??????? 保護柱本質(zhì)上是一個微型柱,理想情況下填充與分析柱相同的填料,并連接在分析柱之前。保護柱中的篩板與分析柱中的篩板類似。這意味著任何可能阻塞分析柱的東西都會被保護柱阻塞。然后可以通過簡單地更換色譜保護柱來移除污染物,從而保護分析柱的使用壽命。

??????? 為了了解保護柱對色譜柱壽命的作用,我們采取了實驗。對于未受保護的色譜柱連續(xù)進樣基質(zhì)會導(dǎo)致反壓穩(wěn)定且不可逆地增加。如果沒有恒譜生液相色譜保護柱保護,反壓會呈指數(shù)級增長。這種背壓的增加最終會導(dǎo)致色譜退化,包括譜帶展寬和可能的峰分裂。因此,方法靈敏度、定量和峰識別也可能受到不利影響。

色譜保護柱?

??????? 使用恒譜生HPLC液相色譜耗材直連(聯(lián))分析保護柱,大大延長了色譜柱的使用壽命。在這種情況下,基質(zhì)的連續(xù)進樣仍會導(dǎo)致壓力升高,但這是由于顆粒物被捕獲在 保護柱本身中,而不是在 UHPLC/HPLC 色譜柱中。因此,只需定期更換直聯(lián)保護柱,反壓即可恢復(fù)到起始水平,有效色譜柱壽命大大延長。

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??????? 六、購買保護柱時我應(yīng)該尋找哪些功能?

??????? 保護柱的填充材料(固定相)應(yīng)與分析柱的填充材料相同,這樣選擇性不會發(fā)生變化。保護柱的 ID 應(yīng)與分析柱的 ID 相同或小于分析柱的 ID,以盡量減少增加的譜帶展寬。始終使用 ID 最接近色譜柱 ID 的防護裝置。保護柱的長度應(yīng)盡可能短以避免額外的死體積。

?新聞底欄

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發(fā)布于: 2022-04-15
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